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La préséniline1 (PS1) lorsqu’elle est mutée, cause la maladie d’Alzheimer sous forme héréditaire. Cette protéine est impliquée dans diverses voies de signalisation, particulièrement la voie de Notch et de la protéine précurseur de l’amyloïde (APP). L’objectif de ce travail était d’étudier la relation entre ces deux voies. Pour ce faire, nous voulions créer une banque d’ADNc à partir de cellules qui surexpriment une portion du gène Notch pour ensuite la cribler par la méthode du double hybride de levure. Malheureusement, nous n’avons pu créer la banque d’ADNc. Cependant nous avons criblé une banque commerciale d’ADNc de cerveau embryonnaire humain en utilisant les sondes constituées par le domaine N-terminal de PS1 (1-132) ainsi que le domaine intracellulaire d’APP (AICD). Différents partenaires ont été identifiés avec les 2 sondes. Parmi ceux-çi, un clone ayant le potentiel de relier les voies de Notch et APP a été identifié avec la sonde AICD.

Mélissa Ferland Dr. Georges Lévesque

Tout au long de ces deux années, j’ai été entourée de personnes extraordinaires qui m’ont permit de réaliser ma maîtrise dans une ambiance de travail très agréable.

J’aimerais particulièrement remercier mon directeur de recherche Dr. Georges Lévesque qui m’a accepté au sein de son équipe. Je lui dis également merci pour sa patience, son écoute, son support et sa disponibilité pour répondre à nos questions et chercher avec nous des solutions à nos problèmes.

L’ambiance du laboratoire fut des plus agréable grâce à mes coéquipiers Chantal Godin (l’assistante de recherche) et Sébastien Hébert (étudiant au doctorat) ainsi que; Christian, Jacqueline, Jean-Sébastien, Marc-Étienne et Nathalie qui partagent le même laboratoire que nous. Leurs diverses connaissances et expériences dans le domaine m’ont permis d’apprendre énormément et surtout de me simplifier la vie à plusieurs occasions.

Je remercie le Dr. Madeleine Carreau et son équipe de laboratoire (Cédric, Marie-Chantal, Isabelle) qui à de nombreuses reprises ont répondu à mes questions et sur qui je pouvais compter si par mégarde une solution quelconque manquait.

Merci à Richard Rhéel pour sa bonne humeur et d’être toujours près à nous aider lorsqu’un problème technique surgit.

Finalement, je veux particulièrement remercier mon copain Dany ainsi que ma famille pour leurs encouragements et leur support tout au long de ma maîtrise.

α alpha

β beta

γ gamma

A adénine ou (désoxy) riboadénosine mono-, di ou triphosphate

-A moins l’acide aminé adénine

a.a acide aminé

βA β amyloïde

ADAM «a disintegrin and metalloproteinase» une désintégrine et métalloprotéinase

ADN acide désoxyribonucléique

ADNc acide désoxyribonucléique complémentaire

AICD domaine intracellulaire d’APP

ApoE4 apolipoprotéine E allèle ε4

APP protéine précurseur de l’amyloïde

APPβ fragment de la protéine précurseur de l’amyloïde obtenu par le clivage par la β-sécrétase

APPα fragment de la protéine précurseur de l’amyloïde obtenu par le clivage par la α-sécrétase

ARN acide ribonucléique

ARNm acide ribonucléique messager

BACE «B-APP cleaving enzyme» enzyme clivant APP

C cytosine ou (désoxy) ribocytidine mono-, di- ou triphosphate

ºC degré celcius

C83 ou C99 fragment C-terminal d’APP de 83 ou 99 acides aminés

C.elegans Caenorhabditis elegans

cfu colonies formant une unité

CO2 dioxyde de carbone

DMEM «Dulbecco’s Modified Eagle Medium» Milieu de culture Eagle de type Dulbecco

DMF diméthylformamide

dNTP désoxyribonucléotide triphosphate ou N = A, C, G, T

DTT dithiothréitol

E.coli Escherichia coli

EDTA tétraacétate de disodium et d’éthylènediamine

EGF «epidermal growth factor» facteur de croissance épidermal

FBS «fœtal bovine serum» sérum de veau foetal

FCT fragment carboxy-terminal

FNT fragment amino-terminal

G guanine ou (désoxy) riboguanosine mono-, di- ou triphosphate

G-418sulfate Geneticin™

GAPDH glycéraldéhyde-3-phosphate déhydrogénase

g/L gramme par litre

-H moins l’acide aminée histidine

HeBS «HEPES buffered saline» tampon salin à partir HEPES

HEK293T «Human embryonic kidney 293T» des cellules embryonnaires de reins humains

HEPES acide sulfonique n-2-hydroxyéthylpipérazine-n-2-éthane

HES «hairy and enhancer of split»

HRP «Horseradish peroxidase»

Kan kanamycine

Kb kilobase d’ADN ou ARN

KCl chlorure de potassium

kDa kiloDalton

-L moins l’acide amine leucine

lacZ gène de la β-galactosidase

LB Luria Bertani

LiAc acétate de lithium

LPR protéines reliées au récepteur des lipoprotéines faibles en densité

mA milliampère

MAH maladie d’Alzheimer sous forme héréditaire

MeOH méthanol

mg milligramme

MgCl2 chlorure de magnésium

MgSO4 sulfate de magnésium

ml millilitre

mmol millimolaire

NaCl chlorure de sodium

Na2HPO4 phosphate de sodium

NaH2PO4.7H2O phosphate de sodium monobasic

Nβ peptide de Notch ressemblant au fragment βA

Neuro2A Neuroblastome de souris

NICD domaine intracellulaire de Notch

Oligo-dT oligonucléotide composé de désoxythymidines

OPTI-MEM «modification of Eagle’s minimal essential medium» milieu modifié du milieu minimal essentiel de Eagle

pb paire de base d’ADN

PBS «phosphate buffered saline» tampon physiologique

PCR réaction de polymérisation en chaîne

PEG polyéthylène glycol

pH «power of hydrogen-power of the concentration of hydrogen ion» mesure de l’acidité ou de l’alcalinité d’une solution

PS1 préséniline 1

PS2 préséniline 2

p/v poids/volume

PVDF polyvinyldifluoride

RE réticulum endoplasmique

RNase ribonucléase

RT transcription inverse

SD «Synthetic Defined» solution avec du «dropout»

SDS dodécyl sulfate de sodium

SDS-PAGE SDS- «page polyacrylamide gel electrophoresis» gel d’électrophorèse de polyacrylamide

T thymine ou (désoxy) thymidine mono-, di- ou triphosphate

-T moins l’acide aminé tryptophane

TACE «tumor necrosis factor alpha converting enzyme»

TAE tris - acide acétique - EDTA

TBS «tris buffered saline» tampon tris avec NaCl

TBST TBS- tween

TE Tris-EDTA

TP température pièce

Tris hydroxyméthyl-aminométhane

Tween Polyoxyéthylène sorbitan monolaurate

U uracile ou uridin mono-, di-, ou triphosphate

μg microgramme

μl microlitre

μM micromolaire

UPR «unfolded protein response» réponse aux protéines mal repliées

U/μl unité par microlitre

UV ultraviolet

VIH virus d’immunodéficience humaine

v/v volume/volume

wt «wild type» ou type sauvage

X-gal 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-galactopyranoside

YPAD milieu YPD(yeast extract-peptone-dextrose) avec de l’adénine