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L’utilisation de la dispase pour détacher les feuillets épidermiques est une étape pouvant être améliorée pour faciliter leurs transferts sur les plaies des grands brûlés. La culture sur colle de fibrine élimine cette étape. Les analyses histologiques et immunohistochimiques n’ont révélé aucune différence importante entre ces deux types de feuillets épidermiques. Le gel de fibrine est donc un substrat adéquat pour la production de feuillets épidermiques greffables. Les équivalents cutanés complets complèteraient le traitement des grands brûlés. Toutefois, la production de feuillets dermiques est limitée par leur temps de production. Étant donné que le RGTA accélère la réparation de plusieurs tissus in vivo , l’effet du RGTA sur la production de feuillets dermiques fut testé. Des examens physiques et histologiques ont montré que le RGTA26 rendait les feuillets fragiles. Les ELISAs et les zymogrammes ont montré une modulation de la production collagénique et des MMPs. L’utilisation du RGTA pour produire les feuillets dermiques n’apparaît pas justifié.

Au cours de mes études de maîtrise, j’ai eu la chance d’approfondir mes connaissances en culture cellulaire en plus d’apprendre de nombreuses techniques immunohistochimiques. J’ai également eu la chance de travailler sur plusieurs projets distincts dans les domaines de pointe que sont la biologie des cellules souches et le génie tissulaire.

De ces investigations, deux ont été choisis pour leur originalité et leur impact scientifique, afin d’être présentées dans le cadre de ce mémoire. Après discussion avec ma directrice de thèse et mes coauteurs, un article concernant la production de feuillets épidermiques cultivés sur colle de fibrine fut rédigé et sera soumis àBurns.

J’aimerais chaleureusement remercier Dre Lucie Germain, ma directrice de thèse, pour m’avoir donné la chance de me joindre à son équipe et de m’avoir consacré temps et encadrement lors de mes études. J’aimerais également remercier le Dr Charles Roberge pour ses nombreux conseils, son encadrement et son aide avec les dosages ELISA. Je tiens également à remercier le Dr Véronique Moulin pour m’avoir permis de profiter de son expertise en ce qui concerne le RGTA et pour son aide précieuse pour l’expéricence d’incorporation de thymidine-3 H. J’aimerais également remercier le Dr François Auger, le directeur du centre de recherche pour son travail qui a permis de mettre en place les conditions qui font du LOEX, en ce qui me concerne, un centre de recherche unique et stimulant.

Je tiens évidemment à souligner le travail de Mme Claudia Fugère, ma coauteure pour l’article intitulé «Human epidermal sheets cultured on plastic and fibrin gels: a comparative study» qui sera bientôt soumis dans Burns et sans laquelle la production du manuscrit en question n’aurait pas été possible.

Je me dois évidemment de remercier le Dr Pr Denis Barritault et le Dr Jean-Pierre Caruelle de l’Université de Paris, sans qui l’étude de l’effet du RGTA sur la production de feuillets dermiques n’aurait pas pu avoir lieu.

Je tiens également à remercier M. Jean Dubé et Mme Julie Guérard pour leur aide en ce qui concerne le perfectionnement du protocole de zymographie et M. Israël Martel pour son aide en ce qui concerne la préparation des lamelles pour les techniques d’immunofluorescences.

J’aimerais également remercier l’ensemble du personnel technique et des assistants de recherche, leur travail réduit considérablement le temps relié à la culture cellulaire et leur camaraderie a grandement contribué au plaisir que j’ai éprouvé à travailler au LOEX.

Je ne peux également pas oublier de remercier mes parents pour le support qu’ils m’ont apporté tout au long de mes études.

Équation 1 : % de variation dans la prolifération cellulaire évalué par l’incorporation de thymidine-3H

Équation 2: Calcul du pourcentage de contraction des feuillets

AH- Acide hyaluronique

AT- Amplificatrice transitoire

BMP- Bone morphogenic protein (Protéine morphogénique des os)

BSE- Bovine spongiform encephalopathy (Encéphalopathie spongiforme bovine)

CAM - Cell adhesion molecule (Molécules d’adhésion de la cellule)

CM- Carboxymethyl

CMB- Carboxymethylbenzylamide

CMBDS- Carboxymethylbenzylamide- O- sulfate

CMDBS- Carboxymethylbenzylamide-sulfonate

CMDS- Carboxymethyl- O- sulfate

CML- Cellule musculaire lisse

CMS- Carboxymethyl-sulfate

D- Acide aspartique (dans le code à une lettre des acides aminés)

d.s.- Degré de substitution

Da- Dalton

DME- Dulbecco-Vogt modification of Eagle’s medium

DPM- Désintégration par minute

EGF- Epidermal growth factor (Facteur de croissance épidermique)

ELISA - Enzyme-linked immunosorbent assay (Titrage immunoenzymatique utilisant un antigène adsorbé)

FAK - Focal adhesion kinase (Kinases des plaques d’adhésion)

FC- Facteur de croissance

FD- Feuillet dermique

FE- Feuillet épidermique

FECCF- Feuillet épidermique cultivé sur colle de fibrine

FGF- Fibroblast growth factor (Facteur de croissance du fibroblaste)

FGF-b Basic fibroblast growth factor (Facteur de croissance du fibroblaste basique)

FITC- Fluorescine-isothiocyanate

G- Glycine (dans le code à une lettre des acides aminés)

GAG- Glycosaminoglycane

Gen- Gentamicine

Gly- Glycine (dans le code à trois lettres des acides aminés)

GPI- Glycosylphosphatidylinositol

HBGF - Heparin binding growth factor (Facteur de croissance pouvant se lier à l’héparine)

HS- Héparane sulfate

K- Cytokératine (kératine)

MEC- Matrice extra-cellulaire

MMP - Matrix metalloproteinase (Métalloprotéinase de la matrice)

PA- Plaque d’adhérence ( focal adhésion )

PDGF- Platelet derived growth factor (Facteur de croissance dérivé des plaquettes)

Pen- Pénicilline

PNH- Peau normale humaine

PPI- Peptide C-terminal du procollagène de type I

R- Arginine (dans le code à une lettre des acides aminés)

RGTA- Regenerating agent (Agent régénérant)

RMN- Résonance magnétique nucléaire

S-Groupement SO3-

SDS- Sodium dodecyl sulfate

SVF-Sérum de veau foetal

TCA-Acide trichloro acétique

TEMED- N,N,N’,N’ -tetramethylethylenediamine

TGF-β- Tumor growth factor-beta (Facteur de croissance tumoral beta)

TIMP- Tissue inhibitor of metalloproteinase (Inhibiteurs des métalloprotéinases tissulaires)

© Éric Boucher, 2005